DNA连接反应中的注意事项。
正确答案:
(1)连接及反应温度;
(2)防止粘末端的自身环化应采取以下措施:
①控制载体与外源DNA分子的浓度与比例;
②用碱性磷酸酶处理载体防止自身环化;
③定向克隆;
(3)用λDNA和科斯质粒的载体时的连接;①λDNA载体应考虑两个参数:插入分子左右臂的比例,两者的浓度;②科斯质粒常用两种方法连接,一种是用碱性磷酸酶处理,另一种是多酶反应进行的克隆。
(2)防止粘末端的自身环化应采取以下措施:
①控制载体与外源DNA分子的浓度与比例;
②用碱性磷酸酶处理载体防止自身环化;
③定向克隆;
(3)用λDNA和科斯质粒的载体时的连接;①λDNA载体应考虑两个参数:插入分子左右臂的比例,两者的浓度;②科斯质粒常用两种方法连接,一种是用碱性磷酸酶处理,另一种是多酶反应进行的克隆。
答案解析:有
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