在研究工作中分离得到一个与动物减数分裂直接相关的基因A，如果想由此获得该基因的单克隆抗体，请简要叙述实验原理及实验方案。
正确答案:（1）实验原理骨髓瘤细胞在体外培养能大量无限增殖，但不能分泌特异性抗体；而抗原免疫的B淋巴细胞能产生特异性抗体，但在体外不能无限增殖。将分离获得的基因A表达的蛋白免疫小鼠脾细胞，免疫脾细胞与骨髓瘤细胞融合后形成的杂交瘤细胞继承了两个亲代细胞的特性，既具有骨髓瘤细胞能无限增殖的特性，又具有免疫的B淋巴细胞合成和分泌特异性抗体的能力。经在HAT培养基（含有次黄嘌呤（H）、氨基蝶呤A.和胸腺嘧啶核苷（T））中进行选择性培养，未融合的脾细胞因不能在体外长期存活而死亡。未融合的骨髓瘤细胞合成DNA的主要途径被培养基中的氨基蝶呤阻断，又因缺乏次黄嘌呤一鸟嘌呤磷酸核糖转移酶（HGPRT），不能利用培养基中的次黄嘌呤完成DNA的合成过程而死亡。只有融合的杂交瘤细胞由于从脾细胞获得了次黄嘌呤一鸟嘌呤磷酸核糖转移酶，因此能在HAT培养基中存活和增殖。经过克隆选择，可筛选出能产生特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞，在体内或体外培养即可无限制地制备单克隆抗体。（2）实验方案①抗原提纯与动物免疫；②骨髓瘤细胞及饲养细胞的制备；③细胞融合；④筛选融合细胞；⑤单克隆抗体的制备和冻存；⑥单克隆抗体的纯化。
答案解析:有
微信扫一扫手机做题