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医学分子生物学

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含U模板法定点诱变的基本原理。

正确答案:为了提高诱变效率,1985年,Kunkel对寡核苷酸定点诱变法进行改进,从而建了的含U模板法,它是当今应用最为广泛的一种寡核苷酸定点诱变法。这种方法的基本原理是:在单链DNA模板中用尿嘧啶核苷酸取代胸腺嘧啶核苷酸,这种模板称为含U模板。它可以在体外进行正常定点诱变实验,即通过DNA聚合酶,以此含U单链DNA作为诱变模板在体外延伸寡核苷酸引物,合成杂合双链DNA分子。当双链DNA分子转化至野生型的E.coli细胞中时,由于这种细胞内含尿嘧啶核苷酶,含U的正链DNA受到破坏,而新合成的带有诱变碱基而不含尿嘧啶核苷酸的负链,则不被正常细胞中的尿嘧啶核苷酶所破坏。因此只有带诱变位点的新合成负链可以保存下来。以此负链为模板合成的双链DNA均为突变体,从而大大提高了诱变效率。
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