简述PCR反应体系，实验中注意的问题。
正确答案:1.PCR原理：PCR是利用DNA合成的原理，合成两个与靶DNA两侧序列互补的引物，在体外进行靶DNA的重复合成。
包括3个步骤：
（1）DNA变性：加热使靶DNA双链解离成两条单链。
（2）引物与靶DNA退火：降低温度至适当水平，促使两个引物根据碱基互补的原理分别结合至靶DNA的两条链的3’末端。
（3）引物延伸：在DNA聚合酶催化下，引物沿着靶DNA3’末端向5’末端延伸（引物延伸是5’→3’方向）。新合成DNA在新一轮变性解离后形成更多的模版与引物退火，在DNA聚合酶催化行，合成新一轮的靶DNA。每一轮DNA的合成均以所有DNA为模版，靶DNA数量呈指数增加。
2.注意问题：引物
（1）引物长度：15~30bp，常用为20bp
（2）引物扩增跨度：以200~500bp为宜，特点条件下课扩增至10kb
（3）引物碱基：G+C含量以40~60%为宜，太少扩增效果不佳，太多易出血非特异性条带；ATGC最后随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸成串排列
（4）避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异性扩增条带
（5）引物3’末端的碱基，特别是最末及倒数第二个碱基，应严格要求配对
（6）引物中有货最好加上合适的酶切位点，被扩增的靶序列最好有适宜的酶切位点
（7）引物特异性：引物与核苷酸序列数据库的其他序列无明显同源性
（8）引物量： 每条引物浓度0.1~1μmol或10~100pmol，以最低引物量产生所需要的结果为好，过高引起错配和非特异性扩增，增加引物之间形成聚体的机会
P.CR循环次数：循环次数觉得PCR扩增程度。主要取决于模版DNA的浓度。一般的循环次数在30~40次，次数越多，非特异性产物量亦随之增多
设立对照：PCR反应应设立阳性和阴性对照，是PCR反应是否成功、产物条带位置及大小是否合理的一个重要参考指标。
包括3个步骤：
（1）DNA变性：加热使靶DNA双链解离成两条单链。
（2）引物与靶DNA退火：降低温度至适当水平，促使两个引物根据碱基互补的原理分别结合至靶DNA的两条链的3’末端。
（3）引物延伸：在DNA聚合酶催化下，引物沿着靶DNA3’末端向5’末端延伸（引物延伸是5’→3’方向）。新合成DNA在新一轮变性解离后形成更多的模版与引物退火，在DNA聚合酶催化行，合成新一轮的靶DNA。每一轮DNA的合成均以所有DNA为模版，靶DNA数量呈指数增加。
2.注意问题：引物
（1）引物长度：15~30bp，常用为20bp
（2）引物扩增跨度：以200~500bp为宜，特点条件下课扩增至10kb
（3）引物碱基：G+C含量以40~60%为宜，太少扩增效果不佳，太多易出血非特异性条带；ATGC最后随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸成串排列
（4）避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异性扩增条带
（5）引物3’末端的碱基，特别是最末及倒数第二个碱基，应严格要求配对
（6）引物中有货最好加上合适的酶切位点，被扩增的靶序列最好有适宜的酶切位点
（7）引物特异性：引物与核苷酸序列数据库的其他序列无明显同源性
（8）引物量： 每条引物浓度0.1~1μmol或10~100pmol，以最低引物量产生所需要的结果为好，过高引起错配和非特异性扩增，增加引物之间形成聚体的机会
P.CR循环次数：循环次数觉得PCR扩增程度。主要取决于模版DNA的浓度。一般的循环次数在30~40次，次数越多，非特异性产物量亦随之增多
设立对照：PCR反应应设立阳性和阴性对照，是PCR反应是否成功、产物条带位置及大小是否合理的一个重要参考指标。
答案解析:有
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