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生物工程

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电泳技术中都有哪些问题?解决这些问题的对策是什么?

正确答案: 1)低离子溶液中,不同电荷的蛋白质分子间会发生相互静电作用,增加溶液离子强度可减少这种作用,但会提高电泳时的电流,使产热更多,温度升高又促进蛋白质的扩散,使区带变宽,分辨率下降.因此电泳缓冲液的离子强度必须控制适当;
2)蛋白质分子所带净电荷主要取决于电泳缓冲液的pH值,应仔细调整和控制电泳缓冲液的pH值,使各组分分子的净电荷数差异加大.但极端pH下蛋白质会变性失活,因此一般控制在pH4.5~9.5之间;
3)缓冲液的种类,浓度和其他电解质浓度影响蛋白质所带电荷的极性和数量,同时还影响蛋白质分子间的相互作用,因此必须根据分离溶质的不同选择合适的缓冲系统;
4)表面活性剂(SDS等)强烈破坏蛋白质分子间的非共价作用,使蛋白质分子为表面溶剂分子所包围,阻止了蛋白质之间的相互作用,同时也消除了不同蛋白质固有的电荷差异;
5)控制电泳介质的有效黏度,包括选择适当的凝胶孔径和添加能增加介质黏度的物质;
6)电泳过程发热量的控制:
发热的难题:蛋白质变性;蛋白质区带扩散,分辨率下降。
对策:
①减少发热:降低电流,提高电压;提高传热表面积;提高材质的传热系数;提高冷却系统的温差。
②减少扩散:增加缓冲系统或介质的黏度可以减少扩散;在微重力作用下进行电泳。
答案解析:
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